研究中使用了哪些生物分子相互作用分析技术?
了解分子之间的相互作用 - 尤其是动力学 - 可以回答诸多问题,因此毫无意外,人们需要在许多研究领域中分析分子之间的相互作用。
例如,为了了解生物体内如何进行信号传送,您可能需要知道分子与受体之间的相互作用方式。或者,在药物发现过程中,您可能希望了解一种药物是否与另一种感兴趣的化合物结合,以及结合的紧密程度。结合亲和力可以告诉我们这一点,但我们可以通过测量结合动力学来了解更多细节。
结合动力学相关的应用领域与技术一样广泛,可以使用多种技术来研究它们。在这里我们比较三种技术。
注意:有关测量相互作用、热力学等的更多信息,请参阅我们的 ITC 技术页面。
何为生物膜层干涉技术?
生物膜层干涉术 (BLI) 是一种无标记的、基于表面的光学分析技术。与其他生物传感器技术不同,BLI 不使用微流体,而是通过将传感器尖端浸入样本/缓冲液中进行工作。从光纤尖端反射的光将根据尖端表面附近的折射率来展示相移。反射光与从内部参考表面反射的光发生干涉。
通过使用白光作为光源,记录光谱干涉图案,其中包括关于尖端表面附近的折射率的信息。当生物分子与浸在实验溶液(例如样本)中的生物膜层表面结合时,折射率分布和光谱图案会发生变化。
优点
- 易于使用
- 几乎无堵塞,适用于复杂、粘稠的样本
- 使用参考尖端,最大限度地减小了体积效应
缺点
- 传感器的灵敏度比 SPR 和 GCI 传感器低几个数量级
- 确定动力学参数时,精度有限
- 测量紧密结合剂和快速结合速率的能力有限;测量受扩散限制
- 测量快速解离速率的能力有限
何为表面等离子共振?
表面等离子共振 (SPR) 是另一种无标记的光学分析方法 – 事实上,它是最早采用的基于表面的无标记分析技术之一。SPR 检测由传感器表面附近的消逝场内的分子相互作用引起的折射率变化。
在这些传感器中,玻璃支架上的金属膜由特定波长的光照射。根据表面附近的折射率,以特定的角度激发所谓的表面等离子体。由于反射光束中缺少能量,因此在投射到传感器上时,会形成强度的“下降”。
通过实时确定下降的位置,SPR 测量金属表面折射率的变化。含有分析物的溶液通过微通道注入,并且使用至少一个参考流动池来消除体积效应。
优点
- 参考流动池消除体积效应
- 可以测量紧密结合剂和快速结合速率
缺点
- 由于使用串联的流动池,对最快转变的检测有限
- 由于容易发生堵塞,需要对传统的微流体进行精心维护
- 测量快速解离速率的能力有限
何为光栅耦合干涉技术 (GCI)?
BLI、SPR 和 GCI:哪种生物分子相互作用分析技术最佳?
最佳的生物分子相互作用分析技术取决于应用场合和用户的目标。下面列出了这三种技术在四个关键要求方面的比较情况:广泛的应用范围、最弱结合剂的测量、最紧结合剂的测量和低系统维护。
光栅耦合干涉技术 (GCI) | 表面等离子共振 (SPR) | 生物膜层干涉技术 (BLI) | |
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最广泛的应用范围 适用于从低分子量到高分子量的各种分子,无论是纯化还是粗制。 | 是 适用于片段、小分子、肽、蛋白质、病毒、细胞培养上清液、血清、细胞裂解物 | 否 适用于小分子、肽(对片段、病毒、细胞培养上清液、血清、细胞裂解物的适用性有限) | 否 适用于细胞培养上清液、血清、细胞裂解液(对肽、蛋白质、病毒的适用性有限) |
测量最弱的粘合剂 得益于快速流体和高采集率,能够以快速解离速率测量动力学。 | 是 解离速率高达 kd=10 s-1 | 否 解离速率高达 kd=1 s-1 | 否 解离速率高达 kd=0.1 s-1 |
测量最紧密的粘合剂 即使对于紧密的粘合剂和快速的结合速率,也能够精确测量动力学。 | 是 流动条件下的测量 | 是 流动条件下的测量 | 否 在扩散受限条件下测量(无微流体) |
系统维护成本低 由于服务或意外维修而导致的停机时间很少。 | 是 无堵塞微流体 | 否 传统微流体 | 是 无微流体 |