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结合动力学

获得优异的亲和力与动力学数据,即使是最具挑战性的样品

Creoptix® WAVE 系统:高通量、自动化、无阻塞、无标记动力学。获得最优的亲和力与动力学数据,即使是最具挑战性的样品。

准确有效地测定分子间相互作用和结合事件是所有基础研究的关键要素,也是药物发现计划不可或缺的组成部分。结合动力学描述了两种分子之间的动态结合相互作用,通常表示为 ka(结合速率)、kd(解离速率)和 KD(平衡解离常数,也称“亲和力”)。ka(也称为 kon)描述了所研究的分子形成复合物的速率。kd(也称为 koff)描述了这种复合物衰减的速率。KD 以 kd/ka 形式计算,并测定平衡时半数配体被分析物占据时的分析物浓度。 

可以使用标记分子(放射性标记、荧光标记等)进行生物分子结合测定,但需要适当的、非破坏性标记,而且通常需要精细的洗涤和纯化步骤。在无标记动力学研究中,待分析的分子之一固定在表面(配体)上,而其他分子则在溶液(分析物)中游离。下面的传感图(实时测量的图形显示)显示了实时分析物/配体结合的典型研究。

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显示基线期、结合期、分离期和回归基线期的典型传感图。

结合动力学分析

首先,如传感图所示,确定基线。简单地说,这只是配体的折射率。然后,加入溶液中未结合的分析物,并以此折射率的变化来测量结合。在结合阶段后,将溶液与未结合的分析物去除,并测量解离。虽然传感图中的信号水平与所涉及的配体和分析物及其相互作用的强度相关,但有价值的信息位于其结合和解离的曲率中。例如,药物的预期生物效应与其滞留时间(解离期)关联,而不仅仅与其亲和力关联。

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使用单一浓度的单一分析物进样(单循环动力学)进行的测量速度很快,但无法得出所有动力学参数的可靠估计值。传统上,动力学是在多循环动力学实验中测量的:可靠和详细的动力学分析需要至少四至六种分析物浓度的数据,范围为预期 KD 的 0.1 至 10 倍。这需要在循环之间进行稀释系列和解离步骤。因此,多循环动力学是时间密集型的,不适合筛选数千种候选化合物。 

无再生动力学允许通过跳过再生步骤进行更快的分析。然而,只有当分析物解离缓慢时,才能应用无再生动力学分析,因为这是基于在分析物浓度增加的循环过程中只有少量分析物解离。Creoptix 开发了一种革命性的检测方法:Repeated Analyte Pulses of Increasing Duration(以不断增加的持续时间对分析物进行重复脉冲处理)- waveRAPID

®

 - 将显著减少测定时间和试剂消耗,同时改进读数以在药物发现过程中更快和更有把握地识别先导化合物。 

waveRAPID 使用单一浓度的分析物脉冲,但每个脉冲的应用持续时间增加。了解我们的方法如何帮助您更快、更轻松地获取动力学数据:新开发的 waveRAPID® 方法和提供一键式评估工具的 Direct Kinetics 软件。

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下载我们的动力学指南 

随着 Creoptix WAVEsystem 的推出,Malvern Panalytical 现在还提供一个研究实时结合动力学的系统。WAVEsystem 可以用来解答广泛的科学问题。这些包括确定两个分子是否相互作用及分子的结合亲和力 (KD),以及确认样品中特定分析物的生物活性浓度。此外,Creoptix WAVEsystem 还可通过实时观察分析物/配体结合来测量结合速率常数 (ka) 和解离速率常数 (kd) 等动力学反应参数。请访问我们关于 GCI 技术的页面,了解为什么 WAVEsystem 及其专有 GCI 技术比传统的表面等离子共振 (SPR) 和生物膜层干涉技术 (BLI) 具有更高的分辨率。

Creoptix WAVEcore

Creoptix WAVEcore

面向工业和学术研究的药物发现和生命科学的下一代生物分析仪器

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测量类型
结合动力学
结合亲和力
无标记分析
技术类型
Grating-coupled interferometry (GCI)
Microfluidics