在这篇技术说明中，我们展示了如何使用 Creoptix WAVE 来精确监测大靶点与分析物分子量 (MW) 比值 (>300:1) 的结合动力学，这要归功于采用格栅耦合干涉测量 (GCI) 技术以测量高灵敏度的扩展传感场。
实时、无标记地分析小分子与药物靶点之间的相互作用为指导药物研发过程和识别有前途的候选药物提供了有价值的信息。然而，弱结合物和大靶点与分析物分子量 (MW) 比值会使动力学表征极具挑战性，因为它们通常需要高灵敏度以及可靠测量快速解离率 (koff) 的能力。
Creoptix® WAVE 波采用专有 格栅耦合干涉测量 (GCI) ，可以提供一流的灵敏度，即使在低信号水平下也能产生高精度的动力学数据。结合稳健的微流控技术，GCI 能够表征非常见溶剂（如乙腈或高浓度的 DMSO）存在下的分子相互作用。
通过测量多种碳酸酐酶 II (CAII) 小分子抑制剂的结合动力学，我们展示了 Creoptix WAVE 如何对较小的弱结合药物分子提供出色的分辨率，从而在不考虑目标与分析物分子量比值的情况下实现全动力学表征。
| 1 呋塞米 | 2 4-氨磺酰苯甲酸 | 3 磺胺 | 4 甲基磺酰胺 | 5a 乙酰唑胺 | 5b 乙酰唑胺 | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| MW (Da) | 330.74 | 201.20 | 172.20 | 95.12 | 222.25 | 222.25 |
| 固定水平 (pg/mm2) | 6050 | 6050 | 6050 | 6050 | 6050 | 1450 |
| 动力学数据 | ||||||
| kon (M-1.s-1) | 3.75x1044 | 2.98x104 | 2.67x104 | 1.15x104 | 1.31x106 | 1.22x106 |
| koff (s-1) | 0.051 | 0.040 | 0.180 | 3.37 | 0.038 | 0.031 |
| km | - | - | - | - | 1.17x107 | - |
| Rmax (pg/mm2) | 30.87 | 16.91 | 12.09 | 3.79 | 13.25 | 4.59 |
| KD (μM) | 1.4 | 1.3 | 293 | 293 | 0.029 | 0.026 |
| 平衡数据 | ||||||
| Rmax (pg/mm2) | 33.37 | 14.57 | 11.75 | 3.34 | 14.05 | 4.83 |
| KD (μM) | 2.4 | 3.8 | 6 | 270 | 0.048 | 0.028 |
表 1：多种碳酸酐酶 II (CAII) 小分子抑制剂的动力学和平衡数据
![[图 1 TN201001-Creoptix-kinetic-analysis-small-molecule-binding.jpg] 图 1 TN201001-Creoptix-kinetic-analysis-small-molecule-binding.jpg](https://dam.malvernpanalytical.com/4b8cec28-9974-49ad-aea2-ae3600e1d18e/Figure%201%20TN201001-Creoptix-kinetic-analysis-small-molecule-binding_Original%20file.jpg)
图 1：碳酸酐酶 II (CAII) 小分子抑制剂的结合动力学
