了解结合亲和力是我们了解生物学过程、结构生物学以及结构-功能关系背后的推动因素,也就是分子之间相互作用的关键所在。 在药物研发过程中也需要测量结合亲合力,以帮助我们设计出能够有针对性和选择性地与目标物相结合的药物。

结合亲和力是指单个生物分子(例如蛋白质或 DNA)与其配体/结合配偶体(例如药物或抑制剂)之间相互结合的强度。 结合亲和力一般是通过平衡解离常数 (KD) 进行测量和报告,此常数用于评估双分子相互作用的强度以及对此类强度进行排序。 KD 值越小,配体对于其目标的结合亲和力就越大。 结合亲和力受非共价键分子间相互作用的影响,例如氢键结合、静电相互作用、两个分子之间的疏水力和范德华力。

有多种方法可用于测量结合亲和力和解离常数,例如 ELISA、凝胶变动分析、拉下分析、平衡透析、分析超速离心、SPR 和光谱分析。 等温滴定量热法 (ITC) 是一种直接的无标记分析方法,可测量相互作用的任意两种生物分子之间的结合亲和力,例如蛋白质-配体结合。 ITC 可测量介于毫摩至纳摩之间的 KD 值,并且还可测定分子间相互作用表征中重要的结合化学计量和结合热力学特性。 这种方法被视为相互作用分析的“黄金标准”,因为它可用于研究各种各样的相互作用以及提供高度量化的 KD 值。