聚集温度 (Tagg) – 它是什么，我们如何计算？
使用Zetasizer测量聚集温度
在动态光散射 (DLS) 中，可以获得溶液中颗粒的水动力学尺寸和尺寸分布。 在Malvern Zetasizer软件中，这种测量可以作为时间和温度的函数，或称为“趋势”来检查。 对于生物蛋白样品，这种温度趋势尤其有趣：尽管在低温下蛋白可能是稳定的，并显示出可重复的尺寸（和散射强度）测量，但通常在某个较高温度（Tagg）下，蛋白分子会倾向于形成寡聚物或聚集。发生这种情况的温度将取决于蛋白本身，以及缓冲液的组成，通常只在测量开始时初始蛋白是均匀的情况下才清楚地观察到。
在应用说明 “使用光散射研究重组人白蛋白的热稳定性 – 预测保存期” 中讨论了一个例子，讨论了重组人白蛋白的稳定性。
Tagg 是如何确定的？
传统的方法是通过观察标准化强度与温度的关系来确定聚集温度 Tagg。聚集点是坡度大于10的第一个点，其中坡度包括之前的5个数据点。此方法可以修改为查看z-平均尺寸，甚至多分散指数。目前的软件包含两种拟合算法：
- 单参数（仅计数率）分析
- 多参数（尺寸和计数率）分析
多参数拟合考虑了水动力学 (z-平均) 尺寸和 (派生) 散射计数率的变化，是首选的方法。当前软件的截图显示了两种分析方法之间的典型差异。
对于在示例结果.dts文件中提供的血红蛋白聚集温度点的示例，旧的单参数方法给出的结果为38ºC，而新的多参数方法给出的结果为42ºC。绝对变化并不太令人担忧，只要在比较不同数据集时使用的是相同的方法。要查看任何数据集的此菜单，突出显示记录，右键单击并选择编辑结果。
为什么Tagg不同于Tmelt？
聚集温度检测聚集的开始；分子倾向于聚集在一起的温度。另一方面，熔化温度，Tmelt 或Tm，是蛋白质（几乎）完全变性后的结果。例如，可以通过差示扫描量热法 (DSC) 或圆二色性 (CD) 来确定的，它们分别可以检测热容量和整体结构的细微变化。由于光散射对小分子尺寸变化和寡聚化开始的极高敏感性，聚集温度 (Tagg) 通常被认为低于熔化温度 (Tmelt)。
如何设置Tagg的测量？
Zetasizer允许自动进行与温度相关的趋势测量。要访问菜单，可以启动手动测量或创建一个SOP。然后在窗口左上角选择测量类型 – 趋势 – 温度 – 尺寸，这将以一些默认设置启动。通过菜单项，特别是趋势序列，其中起始和结束 
温度以及温度间隔可以输入。 在“检查聚集点”旁边打勾。在“尺寸测量”设置下，为每个步骤提供平衡时间。我建议在 “允许只包含相关数据的结果保存” 旁打勾。这将即使样品非常聚集（即超出聚集温度）时也保存数据，并且可能有用。
SOP估算实验时长，并在趋势和尺寸测量部分显示（可能需要单击其他内容以更新计算）。 然后可以像常规测量一样启动SOP或手动测量。
之前
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