卡路里计大师之路 Vol.2 继续
让我们使用等温滴定式卡路里计 iTC200 吧！
※在本文最后可以下载资料。
仲村终于拜访了深田教授的房间。
深田教授！好久不见！您身体还好吗？
仲村，您来啦。我一直在等您呢。这是多少年没见了呢？呵呵。听说您要用ITC和DSC了。
是的，麻烦您了。我在学生时代就知道您在进行测量，但没想到自己有一天也会测量。
呵呵，世事就是这样。那么，从哪里开始好呢？
我在公司用iTC进行测量时，总是不太顺利……所以我总结了一些问题。
哎呀，您准备得很充分嘛。那么，我可以看一下吗？
深田教授检查了仲村的笔记。
仲村，您是有很长时间没用系统了吧？
DP较高且基线噪声水平升高，是其迹象。
更换参考池的水也没有改善吗？
首先，我认为应该彻底清洗。
而且，以后清洗会非常重要。
在我进行测量时，每次都会用清洁剂和超纯水清洗池和注射器。
那么，DP比参考粉末出得高，不是因为气泡
我想应该是这样。用20% Contrad 70或14% Decon 90加热清洗池比较好。我记得操作手册中有提到。
啊，是这个吧！（手册P41和(注1)）
（注1）使用VP-ITC者请参阅手册P.45。要更改夹套温度，请在Thermstat/Calib.选项卡中输入温度，并点击Set Jacket Temp。
教授，当DP较低时，我认为可能是气泡进入了样品池，如何才能避免气泡进入池中呢？
在注入溶液时，可以在注射器中稍微多取一些（350 μL）溶液，尽量靠近毛细管底部，缓慢注入。大多数情况下，这样就够了，但如果是少量溶液，大约50 μL，可以通过泵动使其在池内形成对流，将气泡排出。通常，导管到池中的液体量约为50 μL，所以如果超过这个量进行泵动，尽管已排出气泡，但可能会再次引入气泡，因此需要小心。
此外，慢慢上下摇动注射器，使得积累在池与导管交界处的气泡易于排出。
还有，重要的是！如果溶液温度低于测量温度，应在测量前将其恢复到接近测量温度。对于iTC200的样品来说，通常不需要脱气（注2），厂家表示如此。
随着测量的不断进行，您会掌握技巧，继续坚持下去哦。
（注2）使用VP-ITC者务必在测量前进行脱气。
是的，参比液为什么用超纯水没有问题？通常实验中是最好统一缓冲液的。
参比池中需包含与样品池相同热容量的溶液以抵消外部温度变化。水的热容量非常可观，在溶液中含量最多的就是水，因此参比池用水就足够了而不用缓冲液。
参比水每周换一次即可，但因为蒸发，如果在高温下进行测量，可能需要每次更换。
原来如此。
教授，最后还有一个问题可以吗？
不止一个，您想问什么都可以。
谢谢！关于具体测量样品时浓度的设置，手册中指出可以基于C值，但我不太明白这个概念。
补充一下，C值是为绘制良好的S形曲线而设定的池样品浓度的指引。
由于iTC200配备的控制软件中有模拟软件，所以通过它可以方便地设定条件。不过，一般来说，蛋白质浓度常用10 μM左右，但根据结合强度会有变化，因此需要注意。
根据C值设定浓度时，若是高亲和力相互作用，池浓度可能会非常低。
例如，如果样品解离常数为10 nM，为保持C值在5，
50 nM将是池浓度，可计算得出。但若以此浓度进行测量，可能得不到足够热量，因此至少要确保1 μM（注3）进行测量。
ITC测量中，精确的浓度信息非常重要，尽管以后会说明具体细节，此时用280 nm附近紫外吸收光谱确定蛋白质浓度比较好。
那么现在开始测量吧。先练习使用CaCl2和EDTA。
（注3）由相互作用产生的热量变化各不相同，有时1 μM足够，有时在变化量小的状况下需要提高池浓度进行测量。
下次我们将讨论查看实际数据时的要点，处理故障的方法等内容。
请期待！
为了让这篇博客更加真实，我在深田教授的指导下进行了实地ITC测量采访。
当时他们使用的系统是1987年推出的OMEGA系统。看到近30年前的系统依然在运转，确实令人惊讶。这是我第一次见到实际操作。所用的电脑是Windows 3.1 !? 自然没有USB接口。然而，最令人惊讶的是，系统内部的池一直没有故障，维修过的只有搅拌马达和电脑板。
深田教授非常了解系统特性，还创造了在手册中没有记载的独特使用技巧。而且极为重视测量后的清洗工作。
我将继续与大家分享从教授那学到的技能和知识。
关于MicroCal ITC的历史，请参考位于英国总部的马尔文公司的博客。马尔文英国总部的博客 material talks在这里！
