蛋白质和生物聚合物的DSC（差示扫描量热）测量要点

生物分子稳定性评估仪MicroCal PEAQ-DSC（差示扫描量热仪）用于传达蛋白质和生物聚合物的DSC（差示扫描量热）测量要点。

为了获得高质量的DSC数据，您应该注意哪些事项？样品的状态如何？测量条件呢？？让我们通过以下列表重新确认！

【样品条件】

为了获得高质量的DSC数据，请遵循以下项目。

• 在样品池和参考池中匹配缓冲液的成分。
• 使用透析、脱盐柱或其他缓冲替换方法将样品调整到目标缓冲液。
• 保持用于缓冲替换的透析外液和缓冲液，用于参考池和缓冲液―缓冲液扫描（以下称缓冲液扫描）。
• 建议蛋白质样品浓度为0.1～2 mg/mL。
• DSC获得的T_m（变性中点温度）具有浓度依赖性。
  因此在T_m筛选和等同性评估时，需要统一所有样品浓度。

【测量条件设置】

• 在DSC进行T_m筛选和等同性评估时，所有测量条件（扫描速率、温度范围、反馈模式、预扫描恒温器等）必须一致。热谱图的形状受到扫描速率和反馈模式的影响。
• 温度范围：测量开始温度应设定为比第一个T_m值低10～20℃，结束温度应设定为比最后一个T_m值高10～20℃。
• 扫描速率（通常建议值）
  • 蛋白质、核酸：60～90℃/h
  • 脂质：30～90℃/h
  如果需要提高T_m筛选的通量，可设置为180～240℃/h进行测量（支持机型：PEAQ-DSC、VP-Capillary DSC）。
• 反馈模式
  • 蛋白质：无或低
  • 核酸：低或中
  • 脂质：高
• 预扫描恒温器：建议3～15分钟。

【带自动进样器的系统注意事项】

• 考虑到样品的稳定性，以适当的温度储存。若样品为蛋白质或其他生物高聚物，可将冷却堆温度设定在5～10℃。如果样品稳定，25℃也没有问题。
• 设置Purge/Refills（或充填次数）至少为3次。
• 在方法中加入使用14% Decon90（或20% Contrad70）进行清洁的步骤。

【测量原始数据的质量】

• 样品扫描和缓冲液扫描必须在相同的扫描条件下进行。必要时，可以在各样品前执行缓冲液扫描。
• 频繁进行缓충液扫描，可评估池的洁净程度和设备的正常运作。
• 如果始终在相同的扫描条件下安排测量计划，则应保证高重现性的缓冲液扫描。
  （PEAQ-DSC自动化系统配备了高效的清洗泵和优化的清洗协议，允许在样品测量之间无需缓冲液扫描，连续测量3个或更多样品。）
• 在缓冲液扫描和水―水扫描测量开始时，DP值（mcal/min）必须趋近于零。
• 蛋白质样品测量时，DP值相比于缓冲液扫描会是负值。蛋白质浓度越高，负值越大。如果缓冲液成分差异较小，每1 g/L的蛋白质浓度，样品扫描和缓冲液扫描之间的偏差约为0.15～0.25 mcal/min。(图1)

如果样品扫描和缓冲液扫描之间的DP值偏差超过1 mcal/min，可能原因如下所示。(图2)

• 样品和缓冲液不匹配
• 池污染
• 溶液未充满
• 气泡混入
• 非常高浓度的样品