格栅耦合干涉测量揭示镍离子与基因工程蛋白层的结合动力学与亲和力

可靠测量低分子量分析物与目标物的结合动力学仍然是一项具有挑战性的任务。通常,在这种测量中引入标签根本不可能,采用无标记方法是唯一可靠的选择。 

通过测定 Ni(II) 离子与基因修饰鞭毛蛋白层的结合动力学,我们证明:(1) 格栅耦合干涉测量 (GCI) 非常适合于解析离子的结合,甚至在非常低的蛋白质固定水平下;(2) 它提供了高质量的动力学数据,从这些数据中可以确定可用结合位点的数量和强度;(3) 也可以高精度地获得结合事件的速率常数。使用整合了镍响应转录因子 NikR 的 C 端结构域的鞭毛蛋白变体进行实验。 

将 GCI 结果与滴定量热法的亲和力数据进行比较。我们发现,除了以微摩尔解离常数 (Kd) 为特征的低亲和力结合位点之外,四聚 FliC-NikRC 分子还具有 Kd 值在纳摩尔范围内的高亲和力结合位点。GCI 使我们能够获得摩尔质量低至 59 Da 的分析物特异性结合的实时动力学数据,即使信号低于 1 pg/mm2

可靠测量低分子量分析物与目标物的结合动力学仍然是一项具有挑战性的任务。通常,在这种测量中引入标签根本不可能,采用无标记方法是唯一可靠的选择。 

通过测定 Ni(II) 离子与基因修饰鞭毛蛋白层的结合动力学,我们证明:(1) 格栅耦合干涉测量 (GCI) 非常适合于解析离子的结合,甚至在非常低的蛋白质固定水平下;(2) 它提供了高质量的动力学数据,从这些数据中可以确定可用结合位点的数量和强度;(3) 也可以高精度地获得结合事件的速率常数。使用整合了镍响应转录因子 NikR 的 C 端结构域的鞭毛蛋白变体进行实验。 

将 GCI 结果与滴定量热法的亲和力数据进行比较。我们发现,除了以微摩尔解离常数 (Kd) 为特征的低亲和力结合位点之外,四聚 FliC-NikRC 分子还具有 Kd 值在纳摩尔范围内的高亲和力结合位点。GCI 使我们能够获得摩尔质量低至 59 Da 的分析物特异性结合的实时动力学数据,即使信号低于 1 pg/mm2

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