样品浓度如何影响OMNISEC数据的峰形
有很多因素可以影响您的OMNISEC GPC/SEC数据的质量。这包括诸如分析方法、流动相和柱设置，此外还包括浓度和进样体积等不太明显的参数。
我将浓度和进样体积放在一起讨论，因为它们都影响引入系统的样品量。100 µL进样的2 mg/mL样品与50 µL进样的4 mg/mL样品装载相同的样品量。如果您尝试优化分析条件，这一点需要记住，因为您可以使用同一准备好的样品，只需调整进样体积，而不是制备不同浓度的多个样品。
我的样品的理想浓度是多少？
像许多GPC/SEC相关的事情一样，答案取决于您的样品和系统。一般的样品浓度范围是3-5 mg/mL；这是我第一次分析样品时的目标。如果您有多列的柱设置（多于三根），您可能需要注入比预期更多的样品，因为每列会稀释通过检测器的样品量。然而，如果您正在分析一个您已知的高分子量样品，那么您可能需要使用低于建议的1-5 mg/mL浓度。
您希望注入足够的样品以获得良好的检测器信号，同时确保不会过载柱设置，这可能导致异常的色谱表征。对我而言，理想的样品浓度是在所有检测器上获得可靠响应所需的最小样品量。
我怎么知道列设置是否过载？
这是一个很好的问题！最明显的线索是样品峰的形状。
在下面的图像中，我包含了一个样品峰显示肩峰的多检测器色谱图。仅凭形状本身不一定是一个原因；这种形状可能准确地反映了样品的分子量分布。
然而，如果您期望您的样品具有更高斯的分布，那么您可能会怀疑某些事情并不完全正确。在这种情况下，我首先会检查每个峰的强度，特别是折射率（RI）信号（它直接与样品浓度对应）。
在上述例子中，RI峰高超过400 mV。与峰形一样，仅此并不一定是个问题。但它确实表明在样品浓度（或进样体积）在不变得不可检测的情况下仍有减少的空间。其他检测器的情况也是如此。
因此，确定样品是否过载柱设置，准备了一个稀释系列，以较低的浓度分析样品并监测峰形的任何变化。
稀释系列
除了原始分析外，还进行了三个较低浓度的分析。这些注射的RI色谱图叠加在下面。
正如预期的那样，样品峰的强度随着每次稀释而降低。并且随着第一次稀释，峰形发生了变化——肩峰消失了！这表明首次注射的浓度对于柱设置来说太高了，一旦降低，样品就可以被正确分离，并观察到预期的高斯分布。
Mark-Houwink图
为了确认样品的结构不会随着浓度变化，对所有四次进样的Mark-Houwink图进行了检查，如下所示。
大多数图形都叠加得很好，表明结构一致。这些图的线性表现符合预期的合成线性聚合物，在固定的速率下，分子量（链长）和分子尺寸相互增长。
显示肩峰的首次注射图，用红色表示，在较低分子量区域中呈现肘部，这很可能是因色谱性能受损引起的。
理想的浓度
正如我之前所说，我认为理想的浓度是获得所有检测器上可靠响应所需的最低浓度。在稀释系列的最后一次注射的多检测器色谱图显示，各检测器均能提供强信号且没有肩峰。该浓度约为原始浓度的四分之一。
最后的想法
最后，我希望关于浓度及其对峰形影响的研究能帮助您成为一名更熟练的OMNISEC用户。如果您有任何问题，请不要犹豫联系我们或直接通过电子邮件联系我kyle.williams@malvernpanalytical.com。
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