最佳实践：等温滴定量热法研究结合相互作用 – 第二部分

这是第二篇关于使用 MicroCal PEAQ-ITC、VP-ITC 和 ITC200 系统进行传统结合实验的最佳实践博客。

这是第一篇：等温滴定量热法研究结合相互作用的最佳实践 – 第一部分

准备 ITC：

• 进行 ITC 系统的目视检查，检查松动的电缆连接、损坏的注射器、漏水的管道连接、细胞周围的变色等。
• 确保 ITC 参考池中的水正常，并在使用 ITC 时定期更换水（建议每周一次）。
• 确保 ITC 和控制器已开启，控制软件已打开，仪器在线，仪器的恒温器已设置为实验温度。
  • MicroCal ITC 可以无限期开启并恒温至 25 °C。
• 使用推荐的清洁方案和试剂清洁 ITC 杯和注射器。
  • 建议在每次 ITC 实验后用 20% 的 Contrad 70/14% Decon 90 冲洗 ITC 杯，然后用水冲洗。
  • 定期在 ITC 杯中进行 20% Contrad 70/14% Decon 90 的“浸泡”处理，加热至 60 °C，至少 30 分钟。冷却杯后用水冲洗。如果您正在处理粘性蛋白或其他生物分子，可能需要更频繁的清洁处理。
  • 确保 ITC 注射器在添加配体前用甲醇冲洗并干燥。
  • 您还可以用多次配体溶液冲洗 ITC 注射器。
• 按照推荐的填充和加载协议填充 ITC 杯和注射器。使用 PEAQ-ITC 和 ITC200 时不必对样品进行脱气。
  • 在使用样品填充 ITC 杯之前，用样品缓冲液冲洗 ITC 杯。

ITC 设置：

• 在使用 ITC 数据进行亲和力和热力学参数的筛选和比较时，确保所有实验设计设置相同，包括温度、反馈模式和注射条件。
• 请参见表 1 进行推荐设置。

用于自动的 MicroCal PEAQ-ITC 和 Auto iTC200 系统：

• 在进行 ITC 分析之前，确保样品储存于适宜的温度。对于蛋白质及其他生物分子，将板存储托盘温度设置为 5 至 10 °C。如果您研究的是耐热材料，可以将托盘设置为 25 °C。
• 使用 20% Contrad 70 或 14% Decon 90 进行程序化的细胞和注射器清洁，适当的自动化流程和定期维护。

更多最佳实践将在未来的博客中分享。

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