MicroCal DSC用户必看！关于DSC系统的常见问题解答

by Malvern Panalytical, Monday, 25th February 2019

MicroCal产品的应用经理Verna Frasca将为您解答关于MicroCal DSC新产品PEAQ-DSC的常见问题。即使是使用VP-Capillary DSC的用户，也可以从中获得参考信息。请务必阅读。

Read this article in English here（原文在此）

【Q1：样品的必要量是多少？】

PEAQ-DSC Automated需要至少325 μL，包括死体积。实际上，300 μL会被注入到单元中。这时候，请确保溶液准确地置于96孔板中。

96孔板最大可以填充到400 μL。此时，请在“Load Settings”中的“Well Plate Volume (μL)”输入实际设置的溶液量。（Figure 1.）在PEAQ-DSC Automated中，由自动进样器引起的溶液稀释被软件考虑。在解析时，实际输入的浓度信息中反映了这个稀释倍率。

Figure 1.

在Manual PEAQ-DSC中，使用附带的微量移液器填充250 μL。建议为样品准备270～280 μL的余量。在手动系统中，无需考虑溶液的稀释。

【Q2：为了稳定热历史，一般需要多少次“Warm up”扫描？】

在DSC中，在测量开始前的待机状态下，测量实际样品之前，重复升温和降温的循环以稳定系统的热历史是很重要的。无论是Manual还是Automated PEAQ-DSC，如果系统处于清洁状态，则可在测量样品之前至少进行2至3次水-水或缓冲液-缓冲液扫描，即可完成Warm up。

需要注意的是，在PEAQ-DSC Automated中，将样品类型设为Buffer时，可以在“Assessment Setting”中打钩，最多自动完成5次扫描，直至Warm up完成。

【Q3：PEAQ-DSC Automated中的“Number of Purge Refills”（Figure 2.）是什么？如何设置？】

“Number of Purge Refills”设置的是在从96孔板中将溶液填入单元格之前，使用注射器对孔中的溶液进行几次灌装。在自动进样器中，如果在测量前将含有高浓度盐等的溶液置于板上，可能会出现浓度梯度。因此，如果仅进行一次溶液的灌装，则会出现浓度偏差，溶液的热容也会改变，导致数据的重现性下降。因此，建议至少进行3次Purge/Refills的循环。当溶液在孔中放置超过325 μL或粘性较高时，建议进行5次Purge/Refills循环。

Figure 2.

对于VP-Capillary DSC用户，“Advanced”标签中的“Number of Filling Strokes”具有相同的功能。建议与PEAQ-DSC Automated相同地使用3至5次设置。

【Q4：Clean settings的区别是什么？应该使用哪个？】

保持DSC单元洁净对于获得高质量数据很重要。PEAQ-DSC Automated提供三种清洗选项。推荐的清洗剂为14% Decon90或20% Contrad70。清洗剂放入Reservoir 1。

选择的清洗选项在扫描结束后和下一次样品填充前执行。（注意：在VP-Capillary DSC中，将在扫描开始前、前一个样品测量完成后立即执行。）

Rinse：扫描结束后，装置用水清洗。建议在水-水测量或缓冲液-缓冲液测量时使用Rinse。
Wash：扫描结束后，装置依次用清洗剂和水清洗。建议在每个样品扫描后执行Wash。
Scan：扫描结束后，装置被填入清洗剂，并根据后续计划的扫描条件加热后，用水清洗。此时，为了防止对装置的损害，将Tend设为80 ℃。建议在最后的样品测量结束后或样品粘度较高时在每个样品时使用Scan。Scan的数据保存为“DETERGENTSCAN.dscx”但不用于分析，因此不包括在DMES文件中。

选择Wash或Scan时，默认情况下使用5 mL的水清洗，但水量可增加。PEAQ-DSC Automated进行了验证，显示使用14% Decon90（或20% Contrad70）时，5 mL的水清洗是足够的。然而，依据样品条件或使用其他清洗剂的情况下，需要由用户决定所需的水量，请注意。

此外，在PEAQ-DSC Automated测量开始时的装置状态需要注意。当系统启动时，首先会将装置内清空，并在没有清洗装置的情况下从96孔板中填入溶液。因此，在长期未使用或装置是否洁净未知的情况下，请在“Maintenance”界面选择适当的清洗方法并执行。此外，在PEAQ-DSC Automated中，长时间不进行清洗后将显示警示。（Figure 3）

Figure 3.

在VP-Capillary DSC中，亦可以通过“Maintenance”标签设置装置清洗。（Figure 4）

Figure 4.

对于Manual PEAQ-DSC，建议按照软件附带的影片使用14% Decon90（或20% Contrad70）进行清洗。

【Q5：在PEAQ-DSC交付及OQ（操作确认）期间使用的Reference Material是什么？可以将此材料用作验证样品吗？】

MicroCal PEAQ-DSC Reference Material是寡核苷酸，可以购买。（产品名称：Reference Material Kit，目录编号：MCL2015）VP-Capillary DSC也可使用。该套件包括可以实施两次推荐方法的试剂。

【Q6：在使用VP-Capillary DSC时需要设置“Filtering Period”，但是PEAQ-DSC却没有，为什么？】

在PEAQ-DSC中，Filtering Period依据Scan Rate自动设置。Scan Rate越快，Filtering Period越短（几秒）。获取的热图中，无论Scan Rate，均调整为相同数量的数据点。

【Q7：在PEAQ-DSC组建方法时，想要保存常用的Load/Scan设定怎么办？】

选择要保存的Load条件后，点击Save按钮，适当地命名并保存。保存的条件将在默认的“Load”和“Scan”下以灰色显示。

Figure 5.

【Q8：因为样品浓度搞错了想要更改，怎么操作？】

在“Analysis”界面打开数据，进入“Fit”界面。在热图下的“Concentration (M)”中输入正确的浓度。这时，自动进样器引起的稀释不会自动反映，因此需要事先计算。此外，根据设定的样品量，稀释倍率也会改变，请注意。
重新计算浓度时，请考虑针管内残存的22 μL缓冲液。例如，若将10 μM的样品325 μL设置于孔中，则可在“Concentration (M)”中输入10e-6*325/(325+22)=9.37e-6。

如果想要一次更改多个数据为相同浓度，请在“Records”列表中选择并高亮，然后在“Concentration (M)”中输入浓度信息。如果数据尚未进行模型拟合，请点击“Restore”以确认。如果为Two-state或非Two-state拟合，请点击“Fit”以确认。

Figure 6.

更改浓度后，在“Records”样品名称旁及“Record Information”的“[Cell] (M)”中会添加星号（*）。（Figure 7）

Figure 7.

建议以其他名称保存更改后的文件。

【Q9：如何导出DSC数据？】

在PEAQ-DSC中，可以将数据保存为图形或CSV格式。进入“Reports”画面，选择所需的报告格式。从“Records”列表中选择要导出的数据。（可多选）在显示所需数据的画面的右上方点击导出菜单图标，显示“Export Data”和“Export Image”。（Figure 8）“Export Data”可以保存CSV数据格式。“Export Image”可以保存为所需格式的图形。