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蛋白质分子量测定: 

SEC-MALS与常规校准

溶液中蛋白质的物理性质和行为根据其纯度、配方及其固有特性而有所不同。

尺寸排阻色谱法（SEC）是一种用于观察蛋白质复原、分子量、聚集等因素的强大工具。 

SEC的原理是通过多孔和惰性的柱填料分离样品。小分子更深入地穿过孔，而大分子则被排除，因此更快地通过柱子。这种结果基于流体力学体积的分离，但最终的目的是通常确定分子量。

以前，通过比较未知蛋白质的洗脱时间与已知蛋白质标准的洗脱时间来估算分子量，称为“常规校准”。该方法使用紫外线（UV）等单浓度检测器来执行。  

< Malvern Viscotek SEC-MALS 20 系统 > 

但现在可以使用光散射检测器和浓度检测器（UV或折射率，RI）无论停留时间来测量蛋白质分子量。这对于大多数蛋白质而言非常有用，因为大多数蛋白质不是球形，测得的分子量不准确。在单个SEC测量中添加第二个浓度检测器、IV（固有粘度）、DLS（动态光散射）等检测器时，所获得的信息量将大大增加。

Malvern Viscotek SEC-MALS 20 系统是一种具有20个检测角度的光散射设备，可以测量与洗脱体积无关的蛋白质分子量。该应用说明介绍了使用SEC分离各种蛋白质的内容。

此外，讨论了使用MALS（多角度光散射）或常规校准确定分子量后结果的差异。