DSC 细胞清洗的技巧

基本的细胞清洗理念与 ITC 相同。清洗液的选择、清洗频率和浸泡清洗的温度决定了清洗效果。

由于使用蛋白质等生物高分子进行应用的情况较多，因此通常从如何分解蛋白质的角度来选择清洗液。

以下是具体的清洗方法。

＜操作前的注意事项＞

・清洗液具有强碱性或有害性。在操作时，请务必佩戴适当的防护设备。

・长期浸泡存在因忘记冲洗导致的溶液干固、析出、污垢固着等风险。

・最糟糕的情况下可能对细胞造成不可逆的损害。请在操作时自行承担责任。

・根据污垢的程度，但最长不要超过 1 小时更换溶液。请绝对不要过夜浸泡。

＜使用的物品＞

・清洗液

・气密注射器（如果使用 VP-Capillary DSC Manual 或 VP-DSC）

・附带的微量移液器（PEAQ-DSC Manual 使用时）

・清洗装置（适用于使用 VP-Capillary DSC Manual 或 VP-DSC 的客户，设备附带的 ThermoVac，是可将液体送入样品细胞的清洗工具）

・清洗工具（PEAQ-DSC Manual 附带的清洗工具）

・ThermoVac 或吸引器

＜使用的清洗液及条件＞

・14% DECON90 水溶液（对蛋白质和其他污垢有效，推荐用于日常维护的清洗液。最大浸泡温度 60℃，不超过 1 小时）

・清洗溶液（次氯酸钠和氢氧化钠的混合溶液，特别是对溶解蛋白质能力强，可去除粘附在细胞上的顽固污垢）

　　＜清洗溶液的调配＞

　　　※请佩戴手套和护目镜。

　　　1）溶解 5 克氢氧化钠于约 25 mL 超纯水中。

　　　2）在 1）中加入 50 mL 次氯酸钠溶液（10-15% 氯）。

　　　3）用超纯水定容至 100 mL，充分混合。

　　＜清洗溶液的保存方法＞

　　　清洗溶液在密闭容器中避光保存，至少可有效保存 1 年。

　　　如果观察到沉淀析出，即使在保质期内也应废弃并重新调配。

・1% Zymit（含有蛋白质分解酶的清洗液。请按制造商指定的浓度稀释使用，最大浸泡温度 25℃ ，不超过 12 小时）

＜清洗操作＞

1）安装压力传感器插头

2）移除样品/参比细胞中的超纯水

3）使用气密注射器或微量移液器将清洗液注入两个细胞（按照注入样品的方式操作）

4）将两个细胞中的清洗液一次性倒出

5）再次将清洗液注入两个细胞（尽量去除溢出的清洗液，与样品注入相同的方式操作）

6）将细胞温度设置为目标温度

7）使用纸巾等覆盖细胞端口以防止灰尘进入

8）根据污垢程度浸泡 10 分钟至最长 1 小时

9）浸泡结束后，将细胞温度恢复至 25℃（注意：在清洗液温暖的状态下插入气密注射器可能会损坏注射器或导致细胞内容物飞出）

10）使用气密注射器小心取出已恢复至常温的清洗液，然后立即用充足的超纯水冲洗气密注射器

11）使用气密注射器向两个细胞注入超纯水，慢慢进行泵动操作。上下多次，冲洗整个细胞

12）至少分别冲洗样品/参比各 50-100 mL 超纯水，样品细胞可使用清洗装置进行清洗

13）如果清洗液沾到细胞端口位置，请用浸有超纯水的实验室擦拭布擦拭

14）在将气密注射器针头插入细胞时，请慢慢操作。如果以金属尖端迅速刺到细胞底部，会造成表面划伤，导致噪音或最坏情况下的损坏。冲洗时注入的量请不要超过细胞端口溢出。

15）清洗完成后，请向两个细胞注入超纯水

＜清洗操作时的注意事项＞

・请彻底清洗两个细胞的超纯水。使用 ThermoVac/Cleaning Device 也有效。