ITC单元清洗技巧

清洗受影响的因素有三个。

· 清洗液（是否有能力有效去除单元内的污垢）

· 频率（需要多频繁地重复“清洗”操作）

· 温度（在将清洗液注入两个单元后恒温的温度）

认为清洗液＞频率＞温度，按此顺序重要性递增。将在下一个项目中概述。

清洗液

清洗液的基本原则是不溶解设备，只溶解污垢。

ITC单元采用Hastelloy C276，而其他的支持材料使用了塑料树脂、不锈钢。选用清洗液时，务必选择不会腐蚀、溶解这些材料性质的清洗液。除了推荐的14% DECON90（或20% Contrad70），使用其他清洗液会存在一定风险。

以蛋白质或核酸等常规样品进行的测量，推荐的清洗液为14% DECON90溶液，几乎可以应对所有污垢。此外，对于新设备或定期维护的设备，14% DECON90通常可以处理。

然而，根据污垢的程度和类型，用DECON90清洗可能无法有效去除。例如，近年来有客户使用亲水性高的小分子化合物作为样品。确认在单元发生污垢问题时，50% DMSO溶液的清洗有效。根据目的可以选择下列清洗液。

· 14%(v/v) DECON90水溶液

· 1-5N NaOH水溶液

· 50%(v/v) DMSO水溶液

· 稀释的家庭用餐具洗涤剂

· 2倍稀释的管道清洁剂（Johnson株式会社管道药剂）

· 1％(w/v)柠檬酸水溶液

· 含蛋白质分解酶的清洁剂

频率

使用相同的清洗液，重复进行多次，可能实现污垢的去除。特别是污垢积累时，一次清洗可能不够。通过水-水滴定等测量清洗效果，并使用有效的清洗液数次操作以完美恢复基线或滴定热图。

温度

与家用洗涤剂相同，对于顽固污垢，加热清洗液可提高清洗效果。在高温条件下可能对单元造成损伤，因此请务必通过文献确认对化学药品的耐受性。关于材料（金属、树脂等）的信息在用户手册（英文）的后面。如果不明白，请咨询。

以下是具体的清洗方法。

＜操作前注意事项＞

· 清洗液是强碱或有害物质。操作时必须穿戴适当的防护装备。

· 长时间浸泡存在着因为忘记冲洗引起溶液干固、析出、污垢粘附等风险。

最坏情况下可能对单元造成不可逆的损伤。请在自担风险下操作。

· 根据污垢的程度，最长浸泡期限为1小时。请绝对避免过夜浸泡。

＜使用的物品＞

· 清洗液

· 气密注射器

· 清洗设备（对于VP-ITC用户，使用随附的ThermoVac进行样品单元内注液的清洗工具）

· 美妆分装器（100元均等商店可购的化妆品分装注射器。尖端是平切的，容量20 mL的是好用的）

＜使用的清洗液及条件＞

· 14% DECON90水溶液（对蛋白质，其他污垢有效，常规维护用推荐清洗液。最高浸泡温度60℃，不超过1小时）

· 5N-NaOH水溶液（对蛋白质、肽、核酸等有效。最高浸泡温度60℃，不超过1小时）

· 50% DMSO水溶液（在使用高疏水低分子化合物时有效。最高浸泡温度50℃，不超过30分钟）

此外使用过的清洗液：

· 稀释的家用餐具洗涤剂（2到5倍稀释。对脂质、其他油性物有效。广告语中强调去油污的，最高浸泡温度50℃，不超过30分钟）

· 2倍稀释的管道清洁剂（用于有色物质和污垢、蛋白质等，Johnson管道药剂，最高浸泡温度50℃，不超过30分钟）

· 1%柠檬酸（溶解于酸的污垢，适用于含有Ca、Mg等的Buffer样品，最高浸泡温度50℃，不超过30分钟）

· 1% Zymit（含蛋白质分解酶的清洗液。购买原液，按厂家指定浓度稀释使用。最高浸泡温度25℃，不超过12小时）

＜清洗操作＞

１）除去Sample/Reference两个单元中的超纯水。取出Reference cell plug

２）使用气密注射器将清洗液注入两个单元中（与样品注入单元的方式相同）

３）慢慢进行抽吸操作，使清洗液浸透整个单元

４）将已经注满两个单元的清洗液倒掉

５）再次将清洗液注满两个单元（尽量去除溢出的多余清洗液。与样品注入相同）

６）将单元温度设置为目标温度

７）用纸巾等覆盖单元口以防杂物进入

８）根据污垢程度，浸泡10分钟至最多1小时

９）浸泡完毕后，恢复单元温度到25℃（注意：在温热的状态下插入气密注射器会导致破损或单元内容物飞出）

１０）用气密注射器小心取出恢复常温的清洗液，随后立即用足量的超纯水清洗注射器

１１）使用气密注射器，将超纯水注入双单元，慢慢抽吸。上下移动数次，彻底清洗单元

１２）至少将Sample/Reference分别用50-100 mL的超纯水彻底漂洗。对于Sample单元，使用清洗设备清洗很方便

１３）Sample cell的杯口部分，Reference plug插入部分上也可能沾有清洗液，酌情漂洗

１４）将气密注射器插入单元时要慢慢进行。将金属尖端迅速插入单元底部可能刮伤单元表面，造成噪音甚至损坏。清洗时注入量不溢出单元口为宜

１５）清洗完毕后，为两个单元注入超纯水。

＜清洗操作注意点＞

· 请彻底将两个单元清洗。Sample单元只有，使用ThermoVac/Cleaning Device也有效。

但请一定将Reference cell也用同样方式清洗，因为不能完全漂洗。